Buscando novos antimicrobianos: avaliação da atividade antibacteriana de extratos de Eugenia brasiliensis / Searching for new antimicrobials: evaluation of the antibacterial activity of Eugenia brasiliensis extracts

Objetivo: Devido à atual resistência bacteriana aos antimicrobianos e à necessidade de buscar novas substâncias com essa atividade, principalmente em produtos naturais, esse trabalho objetivou avaliar e comparar o potencial antibacteriano de extratos de folhas da planta Eugenia brasiliensis, ainda pouco estudada, obtidas por coletas sazonais. Métodos: As coletas foram realizadas trimestralmente no Jardim Botânico do RJ (JBRJ) e os extratos etanólicos preparados com o pó das folhas secas. Foram utilizadas cepas de referência ATCC (American Type Culture Collection) Gram positivas de Staphylococcus aureus: 25.923 (Beta Lactamase -) e 29.213 (Beta Lactamase +), e duas Gram negativas, Escherichia coli (28.922) e Pseudomonas aeruginosa (27.853). A técnica de escolha foi a microdiluição em placa de 96 poços, pois permite avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) e posteriormente a concentração bactericida mínima (CBM). Resultados: A melhor atividade antibacteriana (1 mg/mL) foi identificada nos extratos obtidos nos meses mais quentes (menores CIM para bactérias Gram positivas). A CBM foi compatível com a CIM na maioria das estações/cepas bacterianas, indicando possível atividade bactericida dos extratos. Conclusão: A pesquisa demonstrou uma atividade antibacteriana promissora para Gram positivos e existência de variação sazonal, sugerindo um bom potencial para o uso de E. brasiliensis como antimicrobiano. Os resultados também indicam que, no futuro, outros estudos devem ser realizados, como a prospecção química destes extratos.

Objective: Due to the current bacterial resistance to antimicrobials and the need to search for new substances with this activity, mainly in natural products, this work aimed to evaluate and compare the antibacterial potential of Eugenia brasiliensis leaf extracts, still little studied, obtained by seasonal collections. Methods: Leaf collections were made quarterly at the Jardim Botânico do RJ (JBRJ) and ethanol extracts prepared with dry leaf powder. Reference strains ATCC (American Type Culture Collection) Gram positive from Staphylococcus aureus were used: 25923 (Beta Lactamase -) and 29213 (Beta Lactamase +), and two Gram negative strains, Escherichia coli (28.922) and Pseudomonas aeruginosa (27.853). The technique of choice was microdilution in a 96-well plate, as it allows the assessment of the minimum inhibitory concentration (MIC) and subsequently the minimum bactericidal concentration (CBM). Results: The best antibacterial activity (1 mg/mL) was identified in the extracts obtained in the warmer months (lower MICs for Gram positive bacteria). CBM was compatible with MIC in most seasons/ bacterial strains, indicating possible bactericidal activity of the extracts. Conclusion: The research demonstrated a promising antibacterial activity for Gram positive and seasonal variation, suggesting a good potential for the use of E.brasiliensis as an antimicrobial. The results also indicate that in the future, other studies should be carried out, such as the chemical prospecting of these extracts.

Grumixama (Eugenia brasiliensis Lam.) cultivated in the Cerrado has high content of bioactive compounds and great antioxidant potential / Grumixama (Eugenia brasiliensis Lam.) cultivada no Cerrado possui altos teores de compostos bioativos e elevado potencial antioxidante

ABSTRACT: Grumixama (Eugenia brasiliensis Lam.) is a Brazilian berry native to the Atlantic Rainforest. Information on nutritional and bioactive profiles of the fruit cultivated in the Brazilian Savannah (Cerrado) is not available in literature. The aim of this study was to investigate the physical and proximate composition; mineral, total phenolics, total tannins and total carotenoids contents; and antioxidant capacity (DPPH and FRAP assays) of the dark purple grumixama cultivated in the Cerrado area (Goiás State). Results showed a similar physical and proximate composition to those of grumixama native to the Atlantic Rainforest. However, grumixama from Cerrado presented the highest dietary fiber and magnesium contents. In addition, the Cerrado grumixama showed higher content of total phenolics (with a large amount of tannins), carotenoids and antioxidant capacity than those of grumixama native to the Atlantic Rainforest, cherry, blueberry, and fruits native to the Cerrado. Thus, the consumption of whole fruit (peel, pulp and seed) in healthy diets and its use as an ingredient for functional food products should be encouraged.

RESUMO: Grumixama (Eugenia brasiliensis Lam.) é uma 'berry' nativa da Mata Atlântica. Informações sobre o perfil nutricional e bioativo do fruto cultivado no Cerrado não estão disponíveis na literatura. O objetivo deste estudo foi investigar a composição física e centesimal; o conteúdo em minerais, fenólicos totais, taninos totais e carotenoides totais; e a capacidade antioxidante (ensaios DPPH and FRAP) da grumixama roxa cultivada na região do Cerrado (Estado de Goiás). Os resultados mostraram uma composição física e centesimal similar à da grumixama nativa da Mata Atlântica. Entretanto, a grumixama cultivada no Cerrado apresentou teores de fibra alimentar e magnésio superiores. Além disso, a grumixama do Cerrado apresentou maiores teores de compostos fenólicos totais (com grande quantidade de taninos) e carotenoides e maior capacidade antioxidante do que os teores da grumixama nativa da Mata Atlântica, cereja, mirtilo e frutos nativos do Cerrado. Assim, o consumo do fruto inteiro (casca, polpa e semente) em dietas saudáveis e seu emprego como ingrediente em produtos alimentícios funcionais devem ser estimulados.

Anatomia foliar de Eugenia brasiliensis Lam. (Myrtaceae) proveniente de áreas de restinga e de floresta / Foliar anatomy of Eugenia brasiliensis Lam. (Myrtaceae) from restinga and forest areas

O presente trabalho apresenta a anatomia foliar de Eugenia brasiliensis Lam., cujo óleo essencial possui propriedades anti-reumática, diurética, anti-inflamatória, além de ser ativo contra o Tripanosoma cruzi. O estudo foi feito, comparando-se folhas coletadas em áreas de restinga e de floresta, registrando-se as diferenças estruturais resultantes da influência dos fatores ambientais. Anatomicamente, a folha de E. brasiliensis é hipostomática, glabra, dorsiventral, com tendência à isobilateralidade. A epiderme apresenta notável espessamento da cutícula e seus estratos. Em posição subepidérmica, ocorrem numerosas cavidades secretoras de óleos essenciais, nas duas faces da lâmina foliar. No parênquima lacunoso situam-se drusas de oxalato de cálcio. As folhas provenientes da restinga apresentam, em relação àquelas coletadas na floresta, maior quantidade de estruturas secretoras de óleos essenciais, maior concentração de substâncias ergásticas, maior espessamento da cutícula e da lâmina foliar, maior quantidade de estômatos, mesofilo mais compacto, fibras esclerenquimáticas e elementos xilemáticos com maior grau de lignificação e maior densidade da rede vascular. Os dados obtidos são indicativos que a escolha do local de coleta de E. brasiliensis é relevante, tendo em vista que, na área da restinga, observa-se maior produção de óleos essenciais e demais substâncias associadas aos seus efeitos terapêuticos.

The present paper presents the foliar anatomy of Eugenia brasiliensis Lam. The essential oils produced by this species present anti-reumathic, diuretic and anti-inflammatory properties and show activity against Tripanosoma cruzi. This study was carried out by comparison between leaves developed in restinga and forest areas, in order to register the main differences in the structure of this organ related to environmental conditions. Anatomically, the leaf of E. brasiliensis is hipostomatic, glabrous, with dorsiventral mesophyll, whit tendency towards the isobilateral type. Thickness of the cuticle and cutinized wall is noteworthy. In sub-epidermical position, there are many secretory cavities that produce essential oils, in both sides of the foliar blade. In the spongy parenchyma there are calcium oxalate druses crystals. E. brasiliensis leaves developed in restinga area present, in relation to that proceeding from forest, a larger amount of secretory structures, a higher ergastic substances concentration, thicker cuticle and foliar blade, more abundant stomata, a more compact mesophyll, sclerenchyma fibers and xilem elements with a deeper lignification and a greater development of the vascular system. The data obtained in this research suggest that the choice of the area where E. brasiliensis should be collected is important, because in restinga area it presents a greater production of essential oils and other substances associated with therapeutic effects.

Aplicação de cromatografia centrífuga de contra-corrente na purificação de ácido ursólico das folhas de Eugenia brasiliensis Lam. / Aplication of counter-current chromatography in the purification of ursolic acid from leavesof Eugenia brasiliensis Lam.

Os ácidos triterpênicos são metabólitos comuns na família Myrtaceae, especialmente no gênero Eugenia. O ácido ursólico foi descrito como um dos principais constituintes, nas folhas de Eugenia brasiliensis, coletada no Sudoeste do Brasil. Uma partição prévia, por solventes, do extrato etanólico ou do extrato clorofórmico de E. brasiliensis, seguida por uma purificação por cromatografia de contra-corrente de alta velocidade (CCCAV), conduziu ao isolamento do ácido ursólico com alto grau de pureza (> 97 por cento). Esta substância, também foi isolada por cromatografia convencional de coluna aberta (rendimento de 0.22 por cento a partir do extrato etanólico), e caracterizada por 13C-RMN, GC-EM e co-injeção com padrão comercial em CG-DIC, na forma do éster metílico. A técnica de CCCAV, usualmente usada para triterpenos glicosilados, foi aqui aplicada para a aglicona. As fases móvel e estacionária, no experimento de CCCAV, foram geradas pela mistura de n-hexano : acetato de etila : metanol : água, na proporção 10:5:2,5:1. A seleção do sistema de solventes (fases estacionária e móvel) foi determinada pela máxima distribuição eqüitativa do ácido ursólico em ambas as fases, medida por densitometria e monitorada por cromatografia em camada delgada, CCD, usando-se ácido ursólico comercial como referência.

Triterpene acids are common metabolites in the Myrtaceae family, especially in the genus Eugenia. Ursolic acid was found in Eugenia brasiliensis collected in Southeastern Brazil. A previous solvent partition of the ethanol or chloroform extracts of the leavesof E. brasiliensis, followed by rapid high-speed counter-current chromatography (HSCCC) afforded ursolic acid in high purity (> 97 percent). This compound was also purified apart by conventional column chromatography (yield of 0.22 percent from the ethanolic extract) and characterized by 13C-NMR, GC-MS and co-injection of its methyl ester with standards in GC-FID. The HSCCC technique, usually applied to triterpene glycosides, was here applied successfully to an aglycone, to which examples are rarely described. The mobile and stationary phase for the HSCCC experiment were derived from the two-phase solvent system composed by n-hexane : ethyl acetate : methanol : water in the proportion of 10:5:2.5:1. The choice of the developing solvent system for optimum HSCCC separation was determined by TLC coupled to densitometric measurements of ursolic acid in both stationary and mobile phase, generated by the upper and lower layer of the system above. Commercial ursolic acid was used as standard.